藤黄酸通过激活ROS-JNK信号通路诱导非小细胞肺癌细胞凋亡机制的研究

【摘要】[背景和目的]中药藤黄取自藤黄科植物藤黄树分泌的干燥树脂,性寒,味酸、辛、涩,主治痈疽肿毒,顽癣恶疮。藤黄酸(gambogicacid,GA)是中药藤黄的主要活性成份,现代药理学研究证实其具有广谱抗肿瘤活性,有效抑制包括肺癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌等肿瘤细胞的增殖,但GA抑制肺癌细胞增殖的分子机制尚未完全阐明。本研究以非小细胞肺癌细胞株为研究模型,观察GA对细胞生长的抑制作用,分析GA对非小细胞肺癌细胞ROS含量、JNK信号通路活性、线粒体膜电位及凋亡相关蛋白表达的影响,探讨GA诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的分子机制。[实验方法1体外培养人非小细胞肺癌H1975、H292和H460细胞,MTT实验观察不同浓度GA作用细胞24、48和72h对其增殖的影响；AnnexinV-FITC/PI双染法分析GA作用24h后对H1975细胞凋亡率的影响,DFCH-DA法分析GA对H1975细胞ROS含量的影响,JC-1探针染色分析GA作用16h后H1975细胞线粒体膜电位的变化,及Westernblot实验分析GA作用对JNK信号通路活性和凋亡相关蛋白表达的影响。[结果]GA呈剂量-时间依赖抑制非小细胞肺癌细胞的生长,其中H1975细胞对GA较为敏感,不同浓度(0.5、1、2.5、5μM)的GA作用24h后,存活率分别为91.8%±5.1%、.63.7%±3..8%、.31.5%±4.8%、10.6%±2.7%,作用48h后,存活率分别为89.1%±5.4%、41.5%±4.1%、12.2%±3.2%和8.9%±2.1%,作用72h后,存活率分别为84.1%±6.4%、18.5%±3.2%、7.2%±2.0%和6.8%±1.3%。1、2.5和5μMGA作用H1975细胞24h的凋亡率分别为25.2%、51.8%和75.1%,剪切型凋亡相关蛋白caspase9、caspase3和PARP的表达随GA浓度增高而显著增加。GA作用2h,H1975细胞ROS含量显著升高,磷酸化JNK(p-JNK)表达上调。GA作用16h,线粒体膜电位较空白对照组明显下降；GA作用24h,实验组线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bak、Bik表达增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2与空白对照组相比明显下降。[结论]GA具有抑制非小细胞肺癌细胞增殖的作用效应,其分子机制是通过上调胞内ROS含量,激活JNK信号通路,进而引起MMP下降和线粒体凋亡途径的激活诱导细胞凋亡。
【作者】何蕾；
【导师】胡坚；
【作者基本信息】浙江大学，外科学，2013，硕士
【关键词】藤黄酸；非小细胞肺癌；活性氧自由基；JNK信号通路；线粒体凋亡途径；

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